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聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠的配置過程,？

編輯：潔康環(huán)保發(fā)布時間：2018-01-27 10:54:50 來源：http://rrum.cn/ 點擊：0

聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠的配置過程

    （1）制膠在兩塊制膠玻璃板中間放上墊片，放上制膠架,，擰緊制膠螺絲夾緊玻璃板,。制備適量合適濃度的凝膠，使之略多于膠板,。

     不同濃度（%）聚丙烯酰胺凝膠的制法：

     在加入 TEMED 和 10%過硫酸銨后,，立即混勻，倒入放置 45℃角的玻璃板內(nèi),，完全注滿（注意不要有氣泡） ,，迅速將玻璃板放置水平位置,。立即放成型梳子于腔頂并夾緊，待 30-60 分鐘膠聚合后,，取下膠板,，放入電泳槽中固定。

    （2）加樣和電泳上下槽中加入 1×TBE 電泳緩沖液,，溢過加樣孔,，拔出梳子，排出加樣孔中的氣泡,，將 PCR 產(chǎn)物或限制性內(nèi)切酶消化產(chǎn)物 2 與 1 上樣緩沖液混勻,，用微量注射器加入加樣孔底部，使樣品在孔底成一層,，兩側孔中加入標準分子量的 DNA Marker,。以 2-10V/cm 電壓電泳，電泳時間足夠長,，使片斷足以分開,，待指示劑走到適宜位置時關閉電源，將膠片取出,。

     （3）銀染分開兩塊玻璃板,，將凝膠片放入 100ml 銀染固定液中振蕩 15min，雙蒸水洗 3 次,，每次 2min,，然后將凝膠片轉(zhuǎn)入 100ml 0.2%的 AgNO3 中于搖床上染色約 10min，吸去 AgNO3 液,，用雙蒸水洗 3 次,，每次 30s，加入 100ml 顯色液約 7-10min,，待 DNA 帶顯示清除時,，吸去顯色液，加入固定液 Na2CO3,，靜置 2-3min,，取出凝膠觀察。

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